Исследование свободных радикалов крови и ее компонентов у больных ишемической болезнью сердца

Сайфутдинов Рафик Галимзянович 14.00.06 – Кардиология Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Москва, 1984 Работа выполнена в Иркутском государственном медицинском институте МЗ РСФСР   Научный руководитель: академик АМН СССP К.Р. Седов Научный консультант: кандидат физ.-мат. наук О.А. Коваленко Официальные оппоненты: член.-корр. АМН СССP, профессор В.С. Гасилин доктор медицинских наук Н.В. Перова Ведущее учреждение: Новосибирский государственный медицинский институт Общая характеристика работы Актуальность проблемы. Ишемическая болезнь сердца (ИБС), занимая ведущее место в патологии внутренних органов, является одной из основных причин смертности населения (А. Л. Мясников, 1965; Е.И. Чазов, 1977, 1981; B.C. Гасилин, 1976, 1978; В.С. Гасилин, Б.А. Сидоренко, 1981; Б.А. Сидоренко, 1979 и др.). В связи с этим в настоящее время становится всё более актуальным исследование важнейших патогенетических звеньев указанного заболевания. Известно, что атеросклероз коронарных артерий является одной из основных причин ИБС (А. Л. Мясников, 1965; Е.И. Чазов, 1971, 1981; А.И. Струков, 1973; А.К. Вихерт, 1974). К настоящему времени достаточно подробно изучены многие звенья биохимических нарушений при ИБС: белкового обмена (И.М. Ганджа с соавт., 1978; Ю.П. Никитин с coaвт, и др.), липидного обмена (Е.Н. Герасимова, 1978, Н.В. Перова с соавт., 1979, 1980; Е.И. Чазов, 1981; Н.В. Перова, 1982; J.J. Barboriak et al., 1978 и др.), гормонального обмена (Е.Н. Герасимова, 1976; Б.А. Сидоренко с соавт., 1981), электролитного и минерального обменов (Л.Р. Ноздрюхина, 1977; T. Dyckner, 1980 и др.), нарушений обмена витаминов (В.И. Лопушанский,1974 и др.). В этиологии, патогенезе и особенностях развития клинической картины ИБС большую роль играют нарушения окислительно-восстановительных процессов, приводящих к гипоксии тканей и органов (В.Г. Кобулия с соавт., 1981; Б.Ю. Руга с соавт., 1981 и др.). Одним из показателей, характеризующих интенсивность окислительно-восстановительных процессов, происходящих в организме, являются уровень свободных радикалов (СР) (О.Н. Бржевская, 1968; Я.И. Ажипа с соавт., 1969; Ю.П. Козлов, 1973; В. Соmmоner, J.L. Ternberg, 1961; J.R. Mallard, M. Kent, 1969). В этом отношении весьма перспективным является метод электронного парамагнитного резонанса (ЭПР). Использование метода ЭПР в медицине встречается только эпизодически. Основные направления велись в изучении злокачественных новообразований (Н.И. Павлова, А.Р. Левинсон, 1964, 1965; И.А. Кассирский с соавт.,1967; Н.И. Павлова, 1971). Была попытка применения метода ЭПР в токсикологии (М.М. Петяев с соавт.,1966), в диагностике и прогнозе кожных заболеваний (В.П. Шевченко,1973). В литературе имеется только одна работа то изучению уровня СР при ИБС методом ЭПР (Ю.К. Данис с соавт., 1976). Указанные выше исследования были осуществлены на лиофильно высушенных тканях. В работах И.И. Нактинис, Л.Ч. Черняускене (1974), А.Ф. Банина с соавт. (1978), R.A. Floyd et al. (1973), N.J.F. Dodd (I973) и др. показано, что сигнал ЭПР, обусловленный СР с g ~ 2,0057, регистрируемый в лиофилизованных тканях принадлежит СР аскорбиновой кислоты. Однако известно, что сигнал ЭПР, обусловленный СР, получаемый при лиофилизации имеет артефактное происхождение. СР лиофильно высушенных тканей определен переходом ряда физиологических субстратов в свободнорадикальное состояние в процессе подготовки образцов при контакте их с влагой и кислородом воздуха (А.Э. Калмансон, 1963; А.Г. Четвериков с соавт., 1964; И.Г. Харитоненков, 1967; Э.К. Рууге с соавт., 1970; А.Ф. Ванин с соавт., 1978 и др.), поэтому малейшее изменение в параметрах эксперимента, при подготовке анализа (изменение вакуума, температурного режима и т.п.) может привести к изменению качественных и количественных показателей СР в одном и том же объекте исследования. К тому же природа парамагнитных центров (ПМЦ) в высушенных тканях отличается от природы свободно радикальных центров, которые были обнаружены в водосодержащих тканях (L.A. Blumenfeld еt al., 1968; H.M. Swartz et al., 1977). Поэтому лучше исследовать ткани, содержащие естественное количество воды. К сожалению, работ по изучению свободнорадикальных центров при 77° К в материалах, выделенных из организма человека и содержащих естественное количество влаги, крайне мало. T. Kakudo et al. (1980) изучая сигнал ЭПР с g ~ 4,3 и g ~ 2,05, обнаружили в плазме сигнал ЭПР СР с g ~ 2,003. Однако последний сигнал ЭПР они не интерпретировали и не изучали клеточные элементы крови. Учитывая, что СР играют существенную роль в патологических процессах, происходящих в организме, изменчивость спектров ЭПР при различных способах приготовления образцов, недостаточно изученный вопрос о природе свободнорадикальных центров, вносящих вклад в сигнал ЭПР тканей, фиксированных при 77° К объектов человеческого организма; малое количество работ по исследованию концентрации СP в тканях, замороженных в жидком азоте в клинике внутренних болезней, мы поставили перед собой следующую цель: изучить уровень СР методом ЭПР в крови и ее компонентах, фиксированных жидким азотом у больных ИБС и установить имеется ли, взаимосвязь между концентрацией СР и клиническими проявлениями заболевания. Для достижения этой цели были намечены следующие задачи: 1. отработать методики приготовления образцов крови, эритроцитов и плазмы при 77° К и липидов плазмы и эритроцитов при комнатной температуре; 2. выяснить природу ПМЦ, ответственных за сигнал ЭПР СР указанных субстратов с тем, чтобы сделать вывод, за какими процессами можно наблюдать методом ЭПР; 3. исследовать концентрацию СР в образцах крови и ее компонентов у больных ИБС; 4. сопоставить полученные данные с формой и особенностями клинического течения ИБС. Научная новизна: В работе впервые у больных ИБС исследован качественный и количественный состав СР в цельной крови, эритроцитах и плазме крови методом ЭПР при 77° К. Показано, что сигнал ЭПР СР в эритроцитах представляет собой асимметричный синглет с полушириной линии ~12-15 эрстед и g ~ 2,003 — 2,0040, легко насыщающийся в СВЧ-мощности. Детальный анализ спектров ЭПР позволяет предположить наличие в эритроцитах двух типов радикалов. Одному из них соответствует сигнал ЭПР с указанными выше параметрами. Второму – узкий синглет с g ~ 2,0030 – 2,0032 и полушириной линии ~ 4 — 6 эрстед, проявляющийся при низких значениях модуляции. Показано, что более широкий сигнал ЭПР СР в эритроцитах представляет собой семихинон ФАД, являющийся кофактором глютатионредуктазы (ГР). Установлено, что в плазме сигнал ЭПР, обусловленный СР, представляет собой слегка асимметричный синглет с полушириной линии ~ 6 — 8 эрстед и g ~ 2,0024 – 2,0027. Исследовано изменение уровня СР в плазме и эритроцитах при добавлении в кровь адреналина. Введение адреналина в кровь вызывает уменьшение концентрации сигнала ЭПР с g ~ 2,05, обусловленный Сu++, входящий в состав церулоплазмина (ЦП) и увеличение в нем уровня СР. По-видимому, это связано с восстановлением Сu++ в Сu+ с одновременным окислением адреналина и превращением его в СP и образованием фермент-субстратного комплекса с ЦП. В эритроцитах отмечается значительное увеличение концентрации СР без изменения уровня сигнала ЭПР с g ~ 2,063, принадлежащего Сu++ супероксиддисмутазы. Исследованы методом ЭПР липиды, выделенные из плазмы крови. В них получен сигнал ЭПР, обусловленный семихиноном ?–токоферилхинона (?-тфх). Впервые изучены свободнорадикальные центры крови и её компонентов у больных с разными формами ИБС. Показано, что концентрация СР а крови и ее компонентах отражает степень тяжести течения заболевания ИБС. Более высокий уровень СР обнаруживается при нестабильной стенокардии. Отмечена зависимость концентрации СР от наличия осложнений заболевания (сердечной недостаточности и нарушения ритма сердца). Возникновение инфаркта миокарда сопровождается существенным возрастанием уровня СР. Наиболее высокий подъём СР обнаружен при обширных и глубоких инфарктах миокарда. В то же время концентрация СР в крови и ее компонентах у больных с нейроциркуляторной дистонией (НЦД) по кардиальному типу не изменяется. Практическая значимость: Полученные в диссертации данные способствуют выяснению природы и механизмов образования СР и крови и её компонентах, что позволит правильно осмысливать и интерпретировать их при изучении медицинских и биологических материалов. Это имеет практическое значение при определении причины изменений интенсивности сигнала ЭПР крови при различных патологических состояниях в клинике, в результате чего станет возможной коррекция этих изменений. Полученные результаты позволяют рекомендовать метод ЭПР наряду с известными биохимическими способами в качестве диагностики ИБС и оценки степени тяжести различных ее форм. Учитывая различие в концентрации СР крови к ее компонентов при ИБС и НЦД, данный метод может быть использован при дифференциальной диагностике стенокардии от кардиалгии. Анализ ?-тфх в липидах крови и ее компонентов позволит оценивать уровень витамина Е в организме человека. Использование метода ЭПР при изучении свободнорадикальных центров крови при недостаточности кровообращения способствует более чёткому определению прогноза заболевания и корректировке тактики лечений больного. Полученные данные, а также разработанная методика определения CР при 77° К, могут служить основанием для дальнейших разработок по применению метода ЭПР в исследованиях ферментов в организме животных и человека, при изучении механизма действия, кинетики и превращения некоторых лекарственных препаратов (в частности адреналина). Внедрение в практику: Изучение свободнорадикальных центров в крови и её компонентах у больных ИБС внедрено в кардиологическом отделении Областной клинической больницы. По теме диссертации получено два авторских свидетельства на изобретения, четыре удостоверения на рационализаторские предложения. Апробация работы: По теме диссертации опубликовано 14 работ. Из них 8 в центральной печати. Апробация диссертации проведена на межкафедральной конференции в Иркутском государственном медицинском институте (апрель, I983) и на межотделенческой конференции Института кардиологии им. А.Л. Мясникова ВКНЦ АМН СССР (декабрь, 1983). Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 211 страницах машинописного текста. Она состоит из введения, 4-х глав, выводов, практических рекомендаций и приложения, содержит 42 рисунка, 27 таблиц. Приведено 6 выписок из историй болезни. Список использованной литературы включает 171 отечественных и 92 иностранных источников. На публичную защиту выносятся следующие положения диссертации: 1. природа ПМЦ, ответственных за сигнал ЭПР в эритроцитах; 2. природа ПМЦ, ответственных за сигнал ЭПР в плазме крови; 3. природа ПMЦ, ответственных за сигнал ЭПР в липидах плазмы и эритроцитов крови; 4. концентрация СР в крови и ее компонентах у больных с различными формами ИБС; 5. возможность применения метода ЭПР при исследовании тканей, фиксированных при 77° К, в медицине (в частности в кардиологии). Содержание работы Материалы и методы исследований изложены во второй главе диссертации. Нами обследовано 137 больных с различными клиническими формами ИБС. Все больные были распределены на 3 группы, согласно общепринятой классификации ИБС (В.С. Гасилин, Б.А. Сидоренко, 1981): I группа — больные стенокардией (33 чел.): а) со стабильной стенокардией; б) с нестабильной стенокардией; II группа — больные кардиосклерозом (8I чел.): а) со стабильной стенокардией; б) с нестабильной стенокардией; в) безболевая форма; III группа — больные с инфарктом миокарда (23 чел.): а) острый (I) период; б) подострый (II) период; в) период рубца (III). Диагноз той или иной формы ИБС ставили на основании клинических, инструментальных и биохимических данных. Обращали внимание на типичность стенокардитического синдрома (характер болей, локализация, иррадиация, связь е физической и эмоциональной нагрузками» реакция на приём нитроглицерина, частота приступов стенокардии), анамнестические данные (давность заболевания, перенесённый в прошлом инфаркт миокарда), типичность изменений ЭКГ- показателей (наличие признаков хронической коронарной недостаточности, рубцовых изменений миокарда, аневризмы и признаков инфаркта миокарда). При рентгенологическом исследовании учитывали такие симптомы, как гипертрофия левого желудочка, расширение и уплотнение тени аорты, кальциноз. У части больных оценивали сократительную Функцию миокарда левого желудочка с помощью метода поликардиографни (ПКГ) по Блюмбергеру в модификации Карпмана (1965), а также проводили с целью диагностики ИБС велоэргометрическую пробу по методике ступенчато-возрастающей физической нагрузки (Д.М. Аронов, 1979). В качестве контроля исследованы 70 практически здоровых человек (без гиперлипидемии и признаков ИБC в возрасте от 30 до 65 лет). Среди 137 больных ИБС было 110 мужчин и 27 женщин в возрасте от 35 до 65 лет. В работе использовали следующие лабораторные методы исследования: общего анализа крови и мочи; сахара крови ортотолуидиновым методом; общего белка по биуретовой реакции (метод Нетельсона); белковых фракций сыворотки крови методом электрофореза на бумаге (метод Тодорова и Еждика); билирубина и его фракций (метод Кендрашика, Клеггорна и Грофа); развёрнутой коагулограммы, включающей в себя следующие исследования: протромбиновое время (микрометод); фибриноген (метод Р.А. Рутберга.1961); фибриноген «В» (метод Каммайна и Лайонса в модификации Б.П. Балуды с соавт.,1964); время рекальцификации (метод H. Bogerhof, L. Poka, I954) ; фибринолиз за 3 часа; ретракция кровяного сгустка; гематокрит; время кровотечения (метод Дуке); время свёртывания крови (метод Моравица). Также изучали активность ферментов аланинамино-трансферазы (AЛT) и аспартатаминотрансферазы (ACT) колориметрическим методом (S. Peitman, S. Frankel, 1957); содержание калия и натрия в плазме и эритроцитах методом пламенной фотометрии (В.Г.  Колб, В.С. Камышников, I976). Спектр липопротеидов плазмы крови оценивали по уровню общего холестерина (L.L. Abell et al., I952); количество ?-холестерина в составе ?-ЛП измеряли в супернатанте после предварительного осаждения пре-?-ЛП и ?-ЛП гепарином в присутствии ионов марганца (М. Burstein et el., 1970); триглицериды определяли по L.A. Carlson (1963). Соотношение отдельных классов липопротеидов плазмы определяли методом диск-электрофореза в полиакриламидном геле (Е.Я. Маграчева, 1973). Активность глюгатионредуктазы (ГР) оценивали по убыли НАДФ·Н2 в реакционной смеси (E. Bеutler, I973). Об активности ферментов пентозного цикла судили по нарастанию концентрации рибозы и убыли концентрации глюкозы в пробе после ее 3-часовой инкубации (И. Шонка, 1968). Степень гемолиза в плазме крови устанавливали по методу Р.С. Полищук (I965). Нами впервые детально изучены свободные радикалы при температуре 77° К в крови и её компонентах у людей в оценке патологических состояний. Поскольку метод ЭПР в медицине до настоящего времени встречался лишь эпизодически, нам пришлось решить ряд методических вопросов. В частности, обойдя принятую методику лиофилизации образцов, максимально приблизив условия исследования к условиям in vivo, мы разработали способ, в основу которого были положены методические подходы О.А. Коваленко с соавт (1971). Основные этапы методики сводились к следующему. У всех пациентов кровь брали из локтевой вены в пробирку с гепарином утром, натощак, в одно и то же время дня (для исключения влияния циркадного ритма). Цельную кровь тут же замораживали в жидком азоте в тефлоновых пресс-формах. Оставшуюся кровь центрифугировали при 1500 об/мин в течении 10 мин, после чего плазму отделяли от эритроцитов отсасыванием в другую пробирку и центрифугировали при 3000 об/мин в течение 5 мин для осаждения лейкоцитов. Затем плазму крови также замораживали в жидком азоте в пресс-форме. Эритроциты трижды промывали в охлаждённом физиологическом растворе и после приготовления также замораживали в жидком азоте. Затем образцы цельной крови, эритроцитов и плазмы выдавливали из пресс-форм, помещали в кварцевый сосуд Дьюара и термостатировали. Сосуд Дьюара с образцом помещали в резонатор ЭПР-спектрометра. Исследования были проведены на отечественных радиоспектрометрах «Рубин» и PЭ — 1306. Количество СР определяли в относительных единицах в виде отношения амплитуды сигнала ЭПР исследуемого образца к амплитуде сигнала внутреннего стандарта. В качестве внутреннего стандарта использовали 4-ю компоненту сверхтонкой структуры сигнала ЭПР ионов марганца в кристаллической решётка MgO. Статистическую обработку результатов проводили методом вариационной статистики с вычислением критерия достоверности отклонений Стьюдента. Результаты исследований и обсуждение полученных данных изложены в III главе диссертации. В крови, эритроцитах и плазме больных ИБС обнаружены следующие закономерности (табл. 1). Концентрация СР в крови и её компонентах увеличена во всех исследованных группах больных ИБС (стенокардии, кардиосклерозе и инфаркте миокарда). Уровень СР в эритроцитах у больных кардиосклерозом выше, чем у больных стенокардией. Это, по-видимому, связано с тем, что наряду с более тяжелым течением ИБС при кардиосклерозе чаще выявляется недостаточность кровообращения I степени, сопровождающаяся гипоксией тканей и органов (Н.М. Мухарлямов, 1978). Таблица 1 Показатели спектра липопротеидов и содержание СР в крови и ее компонентах у больных и у здоровых лиц (М±m) Показатели крови Контроль, здоровые лица (n=70) Больные стенокардией (n=33) Больные кардиосклерозом (n=81) Больные инфарктом миокарда (n=23) Р 1 2 3 4 ?–ЛП (%) 60,0±3,0 52,0±3,2 43,8±1,9 44,9±3,7 1,4<0,01; 1,3<0,001; 2,4<0,05   ?–ЛП (%) 36,2±2,4 29,9±2,2 35,2±1,4 30,1±2,7 1,2<0,05   Пре–?–ЛП (%) 7,1±2,4 18,1±2,2 20,2±1,4 25,1±3,9 1,4<0,001; 1,3<0,001; 1,2<0,001   Общий холестерин (моль/л) 5,62±0,32 7,22±0,29 6,9±0,23 6,3±0,4 1,3<0,001; 1,2<0,001; 2,4<0,001   ?-холестерин (моль/л) 1,45±0,11 1,20±0,08 1,08±0,04 1,19±0,05 1,4<0,05; 1,3<0,001   ?–холестерин (моль/л) 3,11±0,36 5,64±0,29 5,5±0,23 5,0±0,39 1,4<0,001; 1,3<0,001; 1,2<0,001   Пре-?–холестерин (моль/л) 0,23±0,02 0,34±0,03 0,34±0,02 0,35±0,03 1,4<0,01; 1,3<0,001; 1,2<0,02   Триглицериды (моль/л) 1,11±0,13 1,69±0,14 1,70±0,13 1,75±0,15 1,4<0,01; 1,3<0,001; 1,2<0,001   Фосфолипиды (моль/л) 70,0±4,2 84,1±3,9 78,0±1,9 73,3±6,0 1,2<0,02   СР в крови 44,0±1,5 56,8±2,7 54,1±1,9 62,0±2,8 1,4<0,001; 1,3<0,001; 1,2<0,001 СР в плазме 30,3±0,9 41,8±2,4 41,6±0,57 48,6±2,9 1,4<0,001; 1,3<0,001; 1,2<0,001 СР в эритроцитах 56,0±2,3 65,3±2,0 71,3±2,0 79,3±4,7 1,4<0,05; 1,3<0,001; 1,2<0,001 ?–тфх в лип.плазмы 4,8±0,5 3,7±0,4 2,8±0,2 3,4±0,5 1,3<0,001 ?–тфх в лип.эритр. 3,9±0,3 2,5±0,17 2,9±0,2 2,6±0,4 1,4<0,02; 1,3<0,02; 1,2<0,001 Нужно отметить, что уровень СР в крови и её компонентах у больных стенокардией и кардиосклерозом достоверно выше при обострении заболевания (при нестабильной стенокардии). Так например, при стабильной стенокардии концентрация СР в плазме составляла 36,4±2,5 ед., в то время как при нестабильной — 50,2±3,9 ед. (Р<0,01). Такая же динамика, содержания СР прослеживается и при кардиосклерозе. Так, у больных кардиосклерозом со стабильной стенокардией уровень СР в плазме составил 34,8±2,6 ед., при нестабильной стенокардии — 54,0±3,2 ед. (Р<0,001). В эритроцитах при стабильной стенокардии — 64,4±3,2 ед,, при нестабильной уровень CP в эритроцитах значительно выше и равен 89,6±4,2 ед. (Р<0,001). К тому же проведенный нами корреляционный анализ между уровнем CP в крови и её компонентах и частотой ангинозных приступов выявил тесную взаимосвязь r = + 0,70 (P 0,05), в эритроцитах — на 16,7% (P<0,05), в плазме — на 26,2% (P<0,02). Указанная выше динамика изменения содержания CP в крови и ее компонентах не выявляется у больных с НЦД по кардиальному типу при появлении болей в области сердца. Анализ свободнорадикапьного состояния крови и её компонентов при недостаточности кровообращения показал увеличение уровня СP в I стадии с последующим снижением к III стадии заболевания. Возникающая при недостаточности кровообращения гипоксия тканей и органов (Н.М. Мухарлямов, 1978), вызывает компенсаторное усиление работы глютатионредуктазной системы (ГРС) с генерацией , GSН для защиты Нв от окисления в МетНв. При выраженной степени недостаточности кровообращения уровень CP снижается, по-видимому, из-за общего спада ферментативных процессов. Самый высокий уровень CP в крови и ее компонентах обнаружен в остром периоде инфаркта миокарда. Это, по-видимому, связано с выбросом катехоламинов в кровь во время болевого приступа. Как показали наши исследования, адреналин может повышать активность ГРС в эритроцитах с одновременным увеличением в них концентрации СР. К. тому же в остром периоде инфаркта миокарда происходит активация перекисного окисления липидов (А.Н. Закирова.1981; Э.P. Каценович, 1981), а одним из механизмов снижения концентрации перекисных радикалов в организме является активация ГРС. Самый высокий уровень СР в плазме также обнаружен в остром периоде инфаркта миокарда (48,6±2,9). Он достоверно выше показателей при кардиосклерозе и стенокардии. Это также, по-видимому, связано с выбросом в кровь катехоламинов и активацией перекисного окисления липидов. Нами показано, что введение адреналина в кровь вызывает возрастание концентрации CF в плазме. Исследование ?–тфх в липидах плазмы и эритроцитов больных ЙБС выявило следующие закономерности. Концентрация ?-тфх в липидах снижена во всех исследованных группах больных ИБС. Наиболее низкий уровень ?-тфх выявлен у больных кардиосклерозом. Нужно отметить, что у больных ИБС при обострении заболевания уровень ?-тфх выше, чем у больных со стабильной стенокардией. Так, например, у больных со стабильной стенокардией концентрация ?-тфх в липидах плазмы составила 3,0±0,5 ед,, в то время как при нестабильной стенокардии — 4,4±0,5 ед. (Р< 0,05). В липидах эритроцитов, при стабильной стенокардии – 2,0±0,3 ед., при нестабильной — 2,8±0,2 ед. (Р < 0,05). Чем можно объяснить уменьшение уровня ?-тфх в липидах плазмы и эритроцитов при ИБС? Возможно, это связано со снижением концентрации ?-токоферола (?-тф) в крови (В.И. Лопушанский, 1974; О.Н. Воскресенский, 1973). Нами обнаружено увеличение концентрации ?-тфх в липидах плазмы после трёхдневного введения ?-тф (Р < 0,05) больным ИБС. Концентрация ?-тфх в эритроцитах также повышается, однако статистически не достоверно. Таким образом, уровень ?-тфх в крови может снижаться при уменьшении концентрации ?-тф, но он может снижаться также и при уменьшении перекисного окисления в организме. Так в ряде работ (A.S.Csallary et al., 1970; Е.H.Crugger at al., I970) показано, что взаимодействие ?-тф с перекисными радикалами приводит к образованию ?-тфх. Вероятно in vivo этот метаболит также представляет собой продукт взаимодействия ?-тф с перекисями эндогенных липидов. В пользу такого предположения свидетельствуют и опыты С.А.Буробиной и Е.А. Нейфах (1970), С.А.Аристарховой с coавт. (1975), М.Н.Мерзляк с соавт. (1975), F.Weber, O.Wiss, (1963), отмечающих высокую метаболическую активность фенольной формы витамина Е и показавших, что основная часть введённого ?-тф в организм обнаружена во фракции ?-тфх. По-видимому, ?-тфх является не только индикатором взаимодействия перекисей липидной природы с витамином Е. Еще В.З.Горкин (1959) предполагал об активном участии ?-тфх в биохимических процессах в организме, и даже утверждал, что данное соединение является «активным» продуктом витамина Е. Другие авторы (М.Н.Мерзляк с соавт., 1975; F.D.Vasington et а1., 1960; Р.В.McСау et al., 1971; H.E.Gallo-Tores et al., 1971) также указывают на влияние ?-тфх на жизнедеятельность клеток и тканей. L.Еpstein, D.Gershan (1972) показали, что средняя продолжительность жизни нематод, равная обычно 35 суткам, возрастала до 46 суток, когда в среду вносили ?-тф или ?-тфх в высоких концентрациях. Таким образом, витамин Е играет не только роль антиоксиданта, но и превращаясь в ?-тфх оказывает влияние на метаболизм тканей и органов. Интересные данные получены при исследовании больных инфарктом миокарда. Данное заболевание сопровождается увеличением концентрации ?-тфх в липидах плазмы и эритроцитов, наиболее ярко выраженным во II (подостром) периоде течения болезни. А.И.Журавлёв с соавт. (1970), А.В.Алесенко (1972) — выявили увеличение антиокислительной активности (АоА) липидов в регенерирующих тканях. Обнаруженное нами увеличение концентрации ?-тфх в крови больных во II периоде инфаркта миокарда можно связать с регенерацией ткани миокарда и образованием рубца в мышце сердца. Такую же динамику АоА липидов при инфаркте миокарда наблюдала В.И.Калмыкова (1982). Из этого можно сделать вывод, что при инфаркте миокарда для лучшей динамики образования рубца необходимо дополнительное и максимальное насыщение организма больного антиоксидантами в виде витамина Е. Резюмируя изложенное выше, следует заключить, что комплексное исследование с использованием современных высоко специфичных физико-химических и биохимических методов, выполненное нами на больных ИБС с различными формами и с различным клиническим течением ИБC позволяет сделать вывод о важной роди СР в патогенезе этого заболевания. Полученные результаты позволяют рекомендовать применение исследования СР методом ЭПР в качестве дополнительных диагностических тестов, а также критериев оценки тяжести клинического течения заболевания. Выводы 1. У больных с ишемической болезнью сердца (стенокардией, кардиосклерозом и инфарктом миокарда) наблюдается повышение концентрации свободных радикалов в крови и ее компонентах, более выраженное в остром периоде инфаркта миокарда. 2. При обострении ишемической болезни сердца (при нестабильной стенокардии) уровень свободных радикалов в крови и её компонентах выше, чем при стабильной стенокардии. 3. Ишемическая болезнь сердца протекает со снижением уровня ?-токоферилхинона в организме. 4. Инфаркт миокарда сопровождается увеличением концентрации ?-токоферилхинона в липидах плазмы и эритроцитов, наиболее ярко выраженным во II (подостром) периоде течения заболевания. 5. Недостаточность кровообращения сопровождается снижением концентрации свободных радикалов в крови и её компонентах. 6. При нейроциркуляторной дистонии по кардиальному типу не обнаруживается изменения в содержании свободных радикалов в крови и ее компонентах. 7. Свободные радикалы эритроцитов обусловлены семихинонным состоянием флавинадениндинуклеотида, являющимся кофактором глютатионредуктазы эритроцитов. 8. Вероятно, сигнал ЭПР с g — фактором ~ 2,0024 — 2,0027 и полушириной линии ~ 6 — 8 эрстед в плазме обусловлен свободными радикалами адреналина, образующего фермент — субстратный комплекс с церулоплазмином. 9. Сигнал ЭПР с g-фактором ~ 2,0035 — 2,0037 и полушириной линии ~ 6-8 эрстед в липидах плазмы и эритроцитов обусловлен свободными радикалами ?-токоферилхинона, образующегося из ?-токоферола. 10. Установлена диагностическая ценность анализа свободных радикалов и ?-токоферилхинона в крови и ее компонентах при ишемической болезни сердца. Практические рекомендации 1. Исследование содержания СР в крови и ей компонентах у больных ИБС может быть использовано в качестве дополнительных диагностических тестов для оценки тяжести клинического течения заболевания и эффективности проводимой терапии. 2. Измерение концентрации СР в плазме и эритроцитах может служить одним из дополнительных лабораторных тестов при проведении дифференциальной диагностики стенокардии от кардиалгии. 3. Информативность, быстрота, объективность метода определения концентрации ПМЦ крови и её компонентов позволяет рекомендовать его для внедрении в клиническую практику в качестве простого, удобного, быстрого диагностического метода при ИБC. 4. Определение содержания CР в крови и её компонентах рекомендуется использовать в научных исследованиях, как при изучении ИБС, так и других заболеваний. 5. Изменение уровня ?-тфх в липидах крови больных ИБС поднимает вопрос практической важности — о необходимости медикаментозного воздействия на процессы липопероксидации и обосновывают необходимость включения антиоксидантов (в виде витамина Е) в общий комплекс терапевтических мероприятий при ИБС. 6. Снижение концентрации СР и эритроцитах при недостаточности кровообращения свидетельствует об уменьшении активности энзимов в организме (в частности глюта-тионредуктазы в эритроцитах), что поднимает вопрос о медикаментозном повышении активности ферментов с включением в терапию больных ИБС субстратов (кофакторов), например, НАДФ·Н2, глютатиона и т. п. 7. Метод ЭПР можно применять в медицине для уточнения механизмов нарушения биохимических процессов с участием парамагнитных центров для последующей их коррекции. Список работ, опубликованных по теме диссертации 1. Сайфутдинов Р.Г. Метод ЭПР при исследовании липидов крови доноров. — В кн.: Тезисы докладов к пленуму Правления Всесоюзного научного кардиологического общества «Актуальные проблемы кардиологии в зонах нового экономического освоения», Иркутск, 1978, с.70-71. 2. Сайфутдинов Р.Г. Метод определения свободных радикалов в крови, плазме и эритроцитах людей при 77° К — В кн.: Тезисы докладов к конференции терапевтов, посвящённой 50-летию Иркутского государственного медицинского института "Актуальные проблемы терапии Восточной Сибири, Иркутск, 1980, с.137-138. 3. Артамонов Б.А., Сайфутдинов Р.Г. Свободнорадикальная активность эритроцитов и плазмы до и после операции с искусственным кровообращением. – В кн.: Тезисы докладов Всесоюзной конференции «Кровоснабжение, метаболизм и функция органов при реконструктивных операциях», Ереван, 1981, с.314-316. 4. Седов К.Р., Сайфутдинов Р. Г. Изучение ?-токоферилхинона в липидах крови практически здоровых людей методом ЭПР. — Биофизика, 1981, т. 26, вып. 3. с.571. 5. Сайфутдинов Р.Г. Влияние адреналина на урoвень свободных радикалов в плазме и эритроцитах человека. — Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1982, № 10, с.78-79. 6. Сайфутдинов Р.Г. Исследование методом ЭПР свободнорадикальной активности крови у больных ИБС. — В кн.: Тезисы докладов I Всесоюзного биофизического съезда, Москва, 1982, т. 3, с.107-108. 7. Сайфутдинов Р.Г. Метод ЭПР в медицине — Работа, участвовавшая на конкурсе молодых учёных при Иркутском ОК ВЛКСМ (на правах рукописи), Иркутск, 1982, с.1-62. 8. Седов К.Р., Сайфутдинов Р.Г. Свободнорадикальная активность у больных ИБС. — В кн.: Тезисы докладов I съезда кардиологов Грузии. Тбилиси, 1982, с.144-145. 9. Сайфутдинов Р.Г. Влияние ?-токоферола на уровень ?-токоферилхинона в крови людей. — В кн.: Тезисы докладов к научно-практической конференции «Участке молодежи Иркутской области в решении проблем комплексного освоения природных ресурсов и развития производительных сил области», Иркутск, 1983, с.65-67. 10. Сайфутдинов Р.Г., Седов К.Р. Исследование крови человека, эритроцитов и плазмы методом ЭПР при 77° К. — Биофизика, 1983, т. 28. вып. I, с.87-91. 11. Сайфутдинов Р.Г. Свободнорадикальная активность крови и ее компонентов при недостаточности кровообращения. — В кн.; Тезисы докладов к совместному заседанию Научного Совета по сердечнососудистым заболеваниям АМН СССР, Координационного совета по Государственной программе 0.69.01 и Правления Всесоюзного общества «Актуальные проблемы кардиологии и организации кардиологической службы в Сибири и на Дальнем Востоке», Хабаровск, 1983, с.143-145. 12. Сайфутдинов Р. Г. Изучение свободнорадикальной и формы ФАД в эритроцитах людей. — В кн.: Тезисы докладов Всесоюзного симпозиума «Биохимия, фармакология и медицинское применение производных. витаминов и других предшественников коферментов», Иркутск, 1983, с.115-116. 13. Седов К.Р., Сайфутдинов Р.Г. Способ определения ?-токоферилхинона в биологической жидкости. — Авторское свидетельство № 679206. 14. Сайфутдинов Р.Г., Седов К.Р. Способ определения сохранности жизнеспособности длительно хранившейся крови. — Авторское свидетельство № 912169. Обсуждение основных положений диссертации 1. Пленум Правления Всесоюзного научного кардиологического общества. Иркутск, 1978 г. 2. Научно-практическая конференция терапевтов, кардиологов, эндокринологов, посвящённая 50-летию Иркутского медицинского института, Иркутск, 1980 г. 3. I съезд кардиологов Грузии. Тбилиси, 1982 г. 4. Конференция «Кровоснабжение, метаболизм и функция органов при реконструктивных операциях». Ереван, 1981 г. 5. I Всесоюзный съезд биофизиков. Москва, 1982 г. 6. Научно-практическая конференция, посвящённая участию молодёжи Иркутской области в решении проблем комплексного освоения природных ресурсов и развития производительных сил области. Иркутск, 1983 г. 7. Симпозиум «Биохимия, фармакология и медицинское применение производных витаминов и других предшественников коферментов». Иркутск, 1983 г. 8. Всесоюзная конференция «Актуальные проблемы кардиологии и организация кардиологической службы в Сибири и на Дальнем Востоке», Хабаровск, 1983 г. 9. Областной конкурс молодых ученых им. академика АН СССР М.К. Янгеля. Представленной работе присуждена первая премия Областного комитета ВЛКСМ. Иркутск, 1982 г.

Голосование

Как часто вы болеете простудой?







Кто online

Сейчас 76 гостей онлайн